PXD000004:使用SILAM小鼠脑标准品鉴定和定量人死后额叶皮质蛋白质组

取UPenn脑库认知/神经病理正常人的前额叶皮层切片,300–350 mg灰质在1.5 ml溶液A中匀浆,约100 µl以1% SDS溶解

pride
2012-12-10 更新
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医学影像回归HumanBrainSilamLc-ms/ms
PXD000004: Identification and quantification of human postmortem frontal cortex proteome with a SILAM mouse brain standard

基本信息

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医学影像
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创建/更新时间
2012-12-10

资源简介

PXD000004:使用SILAM小鼠脑标准品鉴定和定量人死后额叶皮质蛋白质组

取UPenn脑库认知/神经病理正常人的前额叶皮层切片,300–350 mg灰质在1.5 ml溶液A中匀浆,约100 µl以1% SDS溶解。400 mg [13C6]标记小鼠脑组织于4 ml缓冲液A中匀浆、离心,粗膜沉淀溶于含1% SDS Tris缓冲液。总蛋白经micro BCA定量加抑制剂。皮层匀浆与[13C6]脑内标按2:1混合,LC-MS/MS分析(来源 ebi.ac.uk)。

【数据内容】

源站描述(机器翻译,仅供参考):来自一名认知和神经病理学正常的人类受试者的前额叶皮层组织切片获自宾夕法尼亚大学(UPenn)脑库。将300–350 mg灰质用特氟龙研杵在1.5 ml溶液A(0.32 M蔗糖、1 mM MgCl2和0.1 mM CaCl2)中匀浆。保存约100 μl匀浆液,用1% SDS增溶并通过离心澄清。为制备[13C6]脑内标(ISTD),将400 mg标记的MouseExpress脑组织(Cambridge Isotopes, MA)如上所述在4 ml缓冲液A中匀浆,以1,000 × g离心10分钟以澄清,于4°C在摇床上振摇30分钟,再以10,000 × g离心20分钟。将沉淀(粗膜级分)溶于2 ml含1% SDS的20 mM Tris pH 7.4中。所有制备物中的总蛋白用micro BCA assay(Pierce)定量,所有溶液均补充蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(Sigma)以及1 mM氟化钠和原钒酸钠(Sigma)。将人皮层匀浆液与[13C6]脑内标(1 μg/μl)按2:1(μg/μg)比例混合并进行LC-MS/MS处理:将40 μl制备物用十二烷基硫酸锂(LDS)(Invitrogen)缓冲液于95°C加热20分钟,在1.5 mm 4–12% Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上分离,切成五个级分,再切成约2 mm的方块,在200 μl含25 mM NH4HCO3的50%乙腈(ACN)中洗涤,在300 μl 10 mM DTT中还原,在300 μl 55 mM碘乙酰胺(Sigma)中烷基化,并用80–120 μl胰蛋白酶(0.025 μg/μl)(Promega)于37°C消化过夜,使胰蛋白酶的量按质量计为待消化总蛋白的1:5。通过涡旋混合和超声处理(各20分钟,重复两次),将肽从凝胶块中回收至200 μl含3%甲酸的50/50 H2O/ACN中。随后将样品蒸…

【主题与分类】

主题标签:Human、Brain、Silam、Lc-ms/ms。本站分类:神经系统疾病。

【获取与许可】

源站页面:https://ebi.ac.uk/pride/archive/projects/PXD000004

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数据说明

来自一名认知和神经病理学正常的人类受试者的前额叶皮层组织切片获自宾夕法尼亚大学(UPenn)脑库。将300–350 mg灰质用特氟龙研杵在1.5 ml溶液A(0.32 M蔗糖、1 mM MgCl2和0.1 mM CaCl2)中匀浆。保存约100 μl匀浆液,用1% SDS增溶并通过离心澄清。为制备[13C6]脑内标(ISTD),将400 mg标记的MouseExpress脑组织(Cambridge Isotopes, MA)如上所述在4 ml缓冲液A中匀浆,以1,000 × g离心10分钟以澄清,于4°C在摇床上振摇30分钟,再以10,000 × g离心20分钟。将沉淀(粗膜级分)溶于2 ml含1% SDS的20 mM Tris pH 7.4中。所有制备物中的总蛋白用micro BCA assay(Pierce)定量,所有溶液均补充蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(Sigma)以及1 mM氟化钠和原钒酸钠(Sigma)。将人皮层匀浆液与[13C6]脑内标(1 μg/μl)按2:1(μg/μg)比例混合并进行LC-MS/MS处理:将40 μl制备物用十二烷基硫酸锂(LDS)(Invitrogen)缓冲液于95°C加热20分钟,在1.5 mm 4–12% Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上分离,切成五个级分,再切成约2 mm的方块,在200 μl含25 mM NH4HCO3的50%乙腈(ACN)中洗涤,在300 μl 10 mM DTT中还原,在300 μl 55 mM碘乙酰胺(Sigma)中烷基化,并用80–120 μl胰蛋白酶(0.025 μg/μl)(Promega)于37°C消化过夜,使胰蛋白酶的量按质量计为待消化总蛋白的1:5。通过涡旋混合和超声处理(各20分钟,重复两次),将肽从凝胶块中回收至200 μl含3%甲酸的50/50 H2O/ACN中。随后将样品蒸发至100 μl体积,用含0.1%甲酸的H2O补至1 ml,用Oasis® HLB小柱(Waters)脱盐,几乎蒸干,并重悬于约45 μl含0.1%甲酸的H2O中

数据加载示例(图像类)

from PIL import Image
import glob, os

files = (glob.glob(os.path.join(path, "**", "*.png"), recursive=True)
       + glob.glob(os.path.join(path, "**", "*.jpg"), recursive=True)
       + glob.glob(os.path.join(path, "**", "*.tif"), recursive=True))
print("图像文件数:", len(files))
img = Image.open(files[0]); print("尺寸/模式:", img.size, img.mode)

# torchvision Dataset 方式:
# from torchvision import datasets
# ds = datasets.ImageFolder(path)  # 要求 子目录=类别

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